原子力顯微鏡不同生物樣品制樣方法:
蛋白質(zhì)、DNA和活細胞是比較有代表性的生物樣品,想要把這些樣品牢固地固定在基底表面上,需要一定的技巧。測生物樣品一般選用云母作為基底云母本身是層狀結(jié)構(gòu),每揭一層都是原子級平整的新鮮表面。所以處理起來比較簡單。云母表面帶負電荷,可以拿云母直接吸附帶正電荷的樣品,蛋白質(zhì)、DNA往往利用靜電相互作用來進行固定。
1、蛋白質(zhì)制樣:蛋白質(zhì)是一個兩性分子,調(diào)節(jié)pH值在等電點附近,蛋白質(zhì)正負電荷相等,分子呈電中性,降低pH時蛋白質(zhì)呈正電。因此對于蛋白質(zhì)來說可以調(diào)節(jié)溶液pH值低于等電點,使樣品直接吸附在云母表面去做成像和力學(xué)研究。
2、 DNA制樣:DNA成像和蛋白質(zhì)類似,DNA帶負電荷,云母表面也帶負電。一種方法可以在溶液中加入正離子,正離子會先吸附在表面上,DNA再吸附在正離子上;另一種方法是用硅烷化試劑把云母表面修飾成氨基結(jié)尾,這樣云母表面帶正電就可以吸附DNA分子。
3、活細胞制樣:活細胞比較大,從光學(xué)顯微鏡下就可以預(yù)先判斷樣品是否適合做AFM原子力顯微鏡。細胞制樣一般推薦覆蓋率50%~70%,貼壁生長,吸得比較牢固,這是非常理想的。如果覆蓋率低,細胞是圓的沒有貼壁,或者是死的一碰就移動。有的可能覆蓋率尚可但表面的細胞可能是死的 已經(jīng)脫離表面。還有的是太密了,有可能是好幾層,*下層是貼壁了,但上層的貼不牢,這些都不是理想的樣品。
細胞制樣
如果細胞不容易貼壁 我們可以借助其他物質(zhì)來幫助細胞吸附在表面上如用聚賴氨酸,膠原蛋白,纖粘蛋白,層黏連蛋白修飾基底,從而提高細胞與其底的粘附力。